说起DNA编辑,你会想到CRISPR/Cas9,那RNA编辑呢?今天就带大家认识一下RNA剪刀手CRISPR/Cas13a。
2017年10月,张锋实验室首先证实CRISPR/Casl3a可靶向编辑哺乳动物体内RNA。比起RNAi,Casl3a有着更强的特异性,并且由于其对哺乳动物细胞而言是非内源性的,因此扰乱细胞中天然的转录后网络的可能性极低。大家都知道,Cas9是利用tracrRNA和crRNA来实现与DNA目标的结合和切割。不过,Cas13a(也叫C2c2)只需要24个碱基的crRNA,它通过富含尿嘧啶的茎环结构与Cas13a分子相互作用,并通过Cas13a的一系列构象变化来促进RNA目标的切割。
Cas13a是VI型CRISPR-Cas系统效应蛋白,具有RNA介导的RNA酶切活性能靶向并切割与crRNA互补的RNA,该编辑系统作为一种新兴的治疗和诊断工具,在病毒性疾病和癌症等领域受到越来越多的关注。
如何快速有效的实现Cas13a蛋白的定量检测,作为专业的生命科学医药原料供应商,Cell Biolabs中国区金牌代理,艾美捷为您推荐:Cas13a蛋白ELISA检测试剂盒,实现Cas13a蛋白的定量检测。
货号 | PRB-5091 |
名称 | Cas13a (CRISPR Associated Protein 13a, C2c2) ELISA Kit Cas13a 蛋白ELSIA检测试剂盒 |
检测灵敏度 | 沙氏纤毛菌的Cas13a蛋白检测极限为31pg/mL |
实验原理 | 本试剂盒用于测量各种细胞和组织裂解液样本中沙氏纤毛菌的Cas13a蛋白的含量。试剂盒提供包被有抗Cas13a蛋白抗体的96孔板,在使用该试剂盒的测定中,样品中的Cas13a蛋白牢固且稳定地结合在孔上。然后加入生物素标记的Cas13a蛋白检测抗体和显色剂进行识别并显色。Cas13a的比例与吸光度的强度成比例。Cas13a的绝对量可以通过与Cas13a标准品进行比较来量化。 |
说明书 | 下载 |
Cas13a 蛋白ELSIA检测试剂盒实验结果:
图1. Cas13a标准曲线
图2. 纯化的Cas13a重组蛋白。 泳道 1:SeeBlue Plus2 MW 标准品; 泳道2:重组的Cas13a蛋白。
重组的Cas13a蛋白的序列(下划线部分是用来免疫生产试剂盒抗体的序列):
MGNLFGHKRWYEVRDKKDFKIKRKVKVKRNYDGNKYILNINENNNKEKIDNNKFIRKYINYKKNDNIL KEFTRKFHAGNILFKLKGKEGIIRIENNDDFLETEEVVLYIEAYGKSEKLKALGITKKKIIDEAIRQG ITKDDKKIEIKRQENEEEIEIDIRDEYTNKTLNDCSIILRIIENDELETKKSIYEIFKNINMSLYKII EKIIENETEKVFENRYYEEHLREKLLKDDKIDVILTNFMEIREKIKSNLEILGFVKFYLNVGGDKKKS KNKKMLVEKILNINVDLTVEDIADFVIKELEFWNITKRIEKVKKVNNEFLEKRRNRTYIKSYVLLDKH EKFKIERENKKDKIVKFFVENIKNNSIKEKIEKILAEFKIDELIKKLEKELKKGNCDTEIFGIFKKHY KVNFDSKKFSKKSDEEKELYKIIYRYLKGRIEKILVNEQKVRLKKMEKIEIEKILNESILSEKILKRV KQYTLEHIMYLGKLRHNDIDMTTVNTDDFSRLHAKEELDLELITFFASTNMELNKIFSRENINNDENI DFFGGDREKNYVLDKKILNSKIKIIRDLDFIDNKNNITNNFIRKFTKIGTNERNRILHAISKERDLQG TQDDYNKVINIIQNLKISDEEVSKALNLDVVFKDKKNIITKINDIKISEENNNDIKYLPSFSKVLPEI LNLYRNNPKNEPFDTIETEKIVLNALIYVNKELYKKLILEDDLEENESKNIFLQELKKTLGNIDEIDE NIIENYYKNAQISASKGNNKAIKKYQKKVIECYIGYLRKNYEELFDFSDFKMNIQEIKKQIKDINDNK TYERITVKTSDKTIVINDDFEYIISIFALLNSNAVINKIRNRFFATSVWLNTSEYQNIIDILDEIMQL NTLRNECITENWNLNLEEFIQKMKEIEKDFDDFKIQTKKEIFNNYYEDIKNNILTEFKDDINGCDVLE KKLEKIVIFDDETKFEIDKKSNILQDEQRKLSNINKKDLKKKVDQYIKDKDQEIKSKILCRIIFNSDF LKKYKKEIDNLIEDMESENENKFQEIYYPKERKNELYIYKKNLFLNIGNPNFDKIYGLISNDIKMADA KFLFNIDGKNIRKNKISEIDAILKNLNDKLNGYSKEYKEKYIKKLKENDDFFAKNIQNKNYKSFEKDY NRVSEYKKIRDLVEFNYLNKIESYLIDINWKLAIQMARFERDMHYIVNGLRELGIIKLSGYNTGISRA YPKRNGSDGFYTTTAYYKFFDEESYKKFEKICYGFGIDLSENSEINKPENESIRNYISHFYIVRNPFA DYSIAEQIDRVSNLLSYSTRYNNSTYASVFEVFKKDVNLDYDELKKKFKLIGNNDILERLMKPKKVSV LELESYNSDYIKNLIIELLTKIENTNDTL
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